Free Cholesterol Assay Kit,游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法-常用生化试剂-试剂-生物在线
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Free Cholesterol Assay Kit,游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法

Free Cholesterol Assay Kit,游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法

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产品名称: Free Cholesterol Assay Kit,游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法

英文名称: Free Cholesterol Assay Kit,游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒 微量法

产品编号: 60724ES60

产品价格: 785.00

产品产地: Yeasen

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2024-12-10T11:18:52

使用范围: null

规格 价格
100 T 785.0
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产品简介

 

游离胆固醇(FC)是构成细胞膜的主要成分,也是合成性激素、胆汁酸、维生素D和肾上腺皮质激素等物质的重要原料,FC浓度可作为脂代谢的指标。本试剂盒的检测方法是微量法,既可以用可见分光光度计检测,也可以用酶标仪检测。该产品的最低检出限是0.119 μmol/mL,线性范围为0.125-6 μmol/mL。


作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,其在500 nm有吸收峰,颜色深浅与FC含量成正比。作用方式如下:

测定总胆固醇(TC)请选择60723ES 总胆固醇(TC)含量检测试剂盒;测定游离胆固醇(FC)请选择60724ES 游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒。

 

产品信息

 

货号

60724ES60

规格

100 T

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

规格

储存条件

60724-A

工作液

20 mL

2~8℃

60724-B

标准品

10 mg

2~8℃

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期6个月。

 

使用说明

 

【注意事项】实验之前建议选择3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内,建议稀释或者增加样本量进行检测。

  1. 需自备的仪器和溶剂:

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水和异丙醇。

  1. 溶液的配制:

1)自备提取液异丙醇:大约需要110 mL,常温保存;试剂盒内提供一个30 mL棕色空瓶,仅做分装使用。

2)标准品溶液的配置:10 mg胆固醇使用前加入517 μL提取液,振荡溶解后即为50 μmol/mL的胆固醇标准溶液,2~8℃可保存4周。

3)标准溶液的稀释:取50 μmol/mL胆固醇标准液20 μL ,加入480 μL异丙醇,充分混匀,配制成2 μmol/mL的标准液。注意2 μmol/mL标准液最好现配现用,实验中每管需10 μL,但为减小实验误差,故配制体积偏大。

3. 操作步骤

1)样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

a. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)进行冰浴匀浆。8000 g,4℃离心10 min,取上清置冰上待测。

b. 细菌/细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300 w,超声2秒,间隔3秒,总时间3 min);然后 8000 g,4℃离心10 min, 取上清置于冰上待测。

c. 血清(浆)等液体样本:直接测定,若有沉淀请离心后取上清待测。

2)测定步骤

a. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至500 nm,分光光度计蒸馏水调零。

b. 按需取出一定量的工作液,37℃水浴预热30 min。

c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步骤加样

试剂名称(µL)

测定管

标准管

空白管

异丙醇

10

-

-

标准液

-

10

-

待测上清

-

-

10

工作液

190

190

190

充分混匀,室温静置15 min,反应完成后测定500 nm处吸光值A,分别记为A测定、A标准和A空白,ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准只需测1-2注:若样本为血清,则空白管中的提取液(异丙醇)需要更换为蒸馏水进行实验。

  1. 总胆固醇含量计算

a. 血清(浆)中 FC 含量计算:

FC含量(μmol/dL)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×100=200×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)

b. 组织或细胞、细菌中 FC 含量计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:FC含量(μmol/mg prot)=C标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A 空白)×V样总÷(Cpr×V样总)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷Cpr

(2)按样本质量计算:FC 含量(μmol/g 质量)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷W=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W

(3)按细胞/细菌数量计算:FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×V样总÷N=(A测定-A 空白)÷(A标准-A空白)

C 标准液:标准液的浓度,2 μmol/mL;V 样总:加入提取液的体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;100:单位换算系数,1 dL=100 mL;500:细菌或细胞数量,500万;N:细胞数量,以万计。

4. 实验实例:

取 0.1 g 大鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用 96孔板测得A空白=0.046、A标准=0.354、A测定=0.127,按样本质量计算含量得:

FC含量(μmol/g 质量)=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W =5.320 μmol/g 质量。

 

注意事项

 

  1. 如果样本吸光值大于1.2,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
  2. 提取液中含有使蛋白变形的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
  1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2. 本产品仅作科研用途!

Ver.CN20240122